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48道基因合成儀誤差來源及分析

  • 發(fā)布日期:2025-06-18      瀏覽次數(shù):188
    •   一、48道基因合成儀設(shè)備相關(guān)誤差:
        1. 加樣系統(tǒng)誤差
        移液精度波動:
        不同通道的移液泵或閥可能存在差異,導(dǎo)致加樣量不一致(如堿基單體分配不均)。
        長期使用后,移液部件磨損或堵塞,造成體積偏差。
        交叉污染:
        通道之間密封性不足,導(dǎo)致液體殘留或揮發(fā)物擴(kuò)散,引起堿基或酶污染。
        2. 溫度控制誤差
        反應(yīng)體系溫差:
        48通道加熱模塊的溫度均勻性不足,部分孔位溫度偏高或偏低,影響延伸效率。
        升溫/降溫速率不一致,導(dǎo)致PCR或連接反應(yīng)不同步。
        熱蓋壓力不均:
        熱蓋與反應(yīng)板接觸不緊密,部分孔蒸發(fā)嚴(yán)重,改變反應(yīng)體系體積。
        3. 檢測系統(tǒng)誤差
        熒光/吸光度檢測偏差:
        不同通道的光學(xué)檢測器靈敏度差異,導(dǎo)致對合成效率的判斷失誤。
        背景噪聲干擾(如熒光淬滅或散射),影響實時監(jiān)測準(zhǔn)確性。
        4. 機(jī)械故障
        磁珠分離或振蕩混勻不均:
        磁力模塊磁場強(qiáng)度差異,導(dǎo)致磁珠回收效率不同,影響洗滌或純化效果。
        振蕩頻率或時間不一致,導(dǎo)致反應(yīng)混合不充分。
        二、48道基因合成儀的操作與流程誤差:
        1. 程序設(shè)置錯誤
        參數(shù)輸入偏差:
        合成周期(如延伸時間、變性溫度)設(shè)置不當(dāng),導(dǎo)致片段長度或錯配率升高。
        未根據(jù)模板類型(如GC含量高、二級結(jié)構(gòu))調(diào)整參數(shù)。
        自動化腳本漏洞:
        多步驟程序(如切割、連接、純化)銜接不當(dāng),導(dǎo)致反應(yīng)中斷或過度處理。
        2. 樣本加載問題
        加樣順序或位置錯誤:
        人工加樣時未按規(guī)范操作(如未更換槍頭),引入外源DNA污染。
        不同通道的起始物料量差異(如引物濃度不同),導(dǎo)致合成效率不均。
        3. 純化與回收效率低
        磁珠或硅膠膜純化損失:
        純化過程中小片段DNA(如短寡核苷酸)吸附損失,降低產(chǎn)量。
        洗滌不徹*,殘留鹽或雜質(zhì)抑制后續(xù)反應(yīng)。
       

       

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